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分子互作实验RIP(RNA免疫沉淀)

更新时间:2026-07-14点击次数:1838

分子互作实验RIP(RNA免疫沉淀)


一、技術介简

RIP(RNA Immunoprecipitation,RNA免疫力滤渣)技术水平是一个种适用于研究方案細胞内RNA与蛋清质互为效用的重要性实验所方式 ,才可以呈现RNA融入蛋清(RBP)在转录后自我调节中的技能机能。


二、技艺道理

RIP运用共性关键蛋清的抵抗能力把合适的RNA-蛋清混合物沉积之后,根据分离法纯化,对紧密结合在混合物上的RNA 去RT-PCR认证或测序阐述,结局最能体现动物学劝说力。

分子互作实验RIP(RNA免疫沉淀)

三、运用情境

1.核心系统:讲解RNA组合淀粉酶(如AGO2、Polycomb结合物)的功能性及RNA管控网路。

2.消化道常见疾病探析:特别消化道常见疾病与合适范本中RNA-血清互作区别,感觉内在的动物图标物(如癌症复发关于lncRNA)。

3.肿瘤肿瘤药物激发:测评肿瘤肿瘤药物对RNA-蛋白酶互作的作用,降速靶点淘汰。


四、技术设备主要优势

1.精确度度较高:可查测低丰度RNA与蛋白质的不大充分做用。

2.gif动态领域广:从一少部分人体细胞(如5×10⁷个)到冗杂组识样例均适用于。

3.多个学联用:融入RNA-Seq、CLIP-Seq或ChIP-Seq,创建多维房产调控网站。


五、范例性质

剥好肿瘤生殖组织性组织系(贴壁肿瘤生殖组织性组织系/透明桌面肿瘤生殖组织性组织系)、冻存肿瘤生殖组织性组织系、冻存组织性、交连后肿瘤生殖组织性组织系范本。


六、样表的需求

细胞核系样品:约1×10^8个(行是15个10cm皿,或以飘浮细胞核系方法保存于离心式分液漏斗,或15个T75瓶);

冻存组织安排:约70mg;化学化学交联细胞系核样板:使用的1%室内的甲醛化学化学交联办理细胞系核。


七、样本量做好准备&运输车

活受损体肿瘤细胞子样表:高度较近的可能将养在皿/T75瓶/抽滤管道的清爽受损体肿瘤细胞子样表常温的发快递(最迟即日达)输送管理,本省内可闪送或亲自递送,高度距离远的,可-80℃冻存受损体肿瘤细胞干冰输送管理;

组织样本&交联后细胞样本:-80℃冻存干冰运输。


八、需提供数据的微生物培养基

检查测量用ChIP级抗体阳性。


九、实验性期

1-2周(不蕴含测序)


十、其它

未果的检查进行RT PCR时,需给出未果的检查的位点。

装修甲醛等有害气体交连血体细胞膜系大概具体步骤:①在血体细胞膜系皿里添加入终浓硫酸浓度为1%的装修甲醛等有害气体,37℃孵育10分种;②利用含[1mM PMSF,1μg/ml抑肽酶和1μg/ml pepstatin A]的阴冷DPBS洗條血体细胞膜系两回。③将血体细胞膜系刮入含核蛋白酶缓和剂的2ml阴冷的DPBS中,并转变到抽滤管内,冻存邮寄。

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